КОМБІНОВАНИЙ ВПЛИВ ІНГІБІТОРА АЛЬДЕГІДДЕГІДРОГЕНАЗИ РОСЛИННОГО ПОХОДЖЕННЯ І СПЕРМІНУ НА КЛІТИНИ РАКУ ПЕРЕДМІХУРОВОЇ ЗАЛОЗИ

Досліджено модифікації цитотоксичної дії сперміну (Spn) на клітини раку передміхурової залози людини (РПЗ) in vitro за рахунок інгібування активності альдегіддегідрогенази (ALDH) силібініном (Sil), який належить до родини флавонолігнанів і є основним діючим компонентом стандартизованого екстракту розторопші плямистої (Silybum marianum) силімарину. Мета: вивчення впливу Sil (окремо або в комбінації з Spn) на життєздатність, електрокінетичні властивості клітин РПЗ, а також на профіль основних і ацетильованих поліамінів (ПА), активність сперміноксидази (SMOX) та поліаміноксидази (PAOX), експресію антиапоптотичного білка Bcl-XL в цих клітинах. Об‘єкт і методи: об`єктами досліджень були високодиференційовані андрогенчутливі клітини лінії LNCaP та низькодиференційовані андрогенрезистентні клітини лінії DU-145. Виживаність клітин оцінювали за тестом з трипановим синім, проліферацію – з кристалічним фіолетовим. ζ-потенціал та щільність сумарного поверхневого заряду (СПЗ) розраховували на основі визначеної методом клітинного мікроелектрофорезу лінійної швидкості руху клітин в електричному полі, а його знак – за напрямом руху. Активність ферментів катаболізму PA оцінювали за змінами рівня їх субстратів у клітинах: Spn для SMOX та N1-ацетилспермідину (N1-AcSpd) – для PAOX. Експресію білка Bcl-XL визначали з застосуванням електрофорезу в акриламідному гелі та Вестерн-блотингу. Результати: визначені інгібуючі концентрації (ІС50) Sil за умови використання чистої сполуки та при комбінованій дії з Spn. Культивування клітин LNCaP з чистим Sil, чистим Spn або з їх комбінацією викликало зниження ζ-потенціалу і інверсію знаку СПЗ з від`ємного на позитивний. Величина позитивного заряду у даних варіантах достовірно не відрізнялася, що свідчило про конкуренцію між Sil і Spn за ділянки зв`язування. Культивування клітин DU-145 з Sil призводило до збільшення ζ-потенціалу, з Spn – до його зниження, комбінація Sil зі Spn – повернення до контрольних значень. Sil, Spn, і їх комбінація викликали інверсію знаку СПЗ клітин DU-145 на позитивний, але Spn спричиняв достовірно меншу його величину порівняно з клітинами LNCaP, що свідчило про відмінності іонного аранжування андрогенрезистентних і анрогенчутливих клітин. Sil продемонстрував антипроліферативну та проапоптотичну дію на клітини LNCaP, пропорційно залежну від концентрації. Показані відмінності в іонному аранжуванні клітин LNCaP і DU-145. Виявлено конкуренцію між Sil і Spn за ділянки зв`язування на клітинній поверхні. Sil в клітинах ліній LNCaP та DU-145 викликав різноспрямовані зміни активності SMOX і PAOX. Sil і його комбінація з Spn викликали зниження експресії гена Bcl-XL на рівні кодованого ним антиапоптотичного білка. Комбінована дія була максимальною в андрогенрезистентих клітинах DU-145. Висновки: відмічали кількісно протилежний характер впливу Sil та Spn на клітини РПЗ з різним ступенем диференціювання і різною агресивністю пухлинного росту. На менш злоякісні андрогенчутливі клітини LNCaP сильніший цитотоксичний вплив мав Sil, водночас життєздатність більш агресивних андрогенрезистентних клітин DU-145 потужніше пригнічував Spn. У випадку комбінованої дії Sil і Spn мав місце тандемний альдегідний шок: Sil не тільки здійснював власний ефект, опосередкований через накопичення отруйних альдегідів, але й підсилював цитотоксичні властивості Spn, пригнічуючи ALDH-залежні шляхи детоксикації.