Der Einfluss des PD-1-Inhibitors (Nivolumab) auf die Behandlung von alveolären Rhabdomyosarkomen mit ErbB2-spezifischen CAR-NK-92- Zellen (NK-92/5.28.z)

Das Rhabdomyosarkom ist der häufigste Weichteiltumor des Kindesalters und die Prognose ist, insbesondere bei alveolärer Histologie in Kombination mit anderen prognostisch ungünstigen Faktoren, wie ein Alter über neun Jahren oder einer Knochenmarksbeteiligung, weiterhin sehr schlecht. Aus diesem Grund ist es notwendig, neue Behandlungsstrategien für diese Patientengruppe zu entwickeln. In dieser Arbeit wurde der Einfluss des PD-1-Inhibitors Nivolumab auf die Toxizität der ErbB2-spezifischen CAR-NK-92-Zelle, NK-92/5.28.z, gegen die alveoläre Rhabdomyosarkom-Zelllinie RH30 untersucht. Die spezifische und effektive Lyse von RMS-Zellen vermittelt durch den ErbB2-spezifischen CAR konnte sowohl in einem 2D- als auch 3D-Modell in vitro nachgewiesen werden. Des Weiteren wurde mittels einer FACS-Analyse gezeigt, dass die alveoläre Rhabdomyosarkom-Zelllinie RH30 auf einem stabilen Niveau PD-L1 exprimiert. Ebenso konnte eine Expression von PD-1 auf der NK-92/5.28.z nachgewiesen werden. Auch war in einem Versuch der Anteil an PD-1 exprimierenden Zellen bei mit RH30-Zellen stimulierten NK-92/5.28.z höher als bei unstimulierten NK-92/5.28.z. Allerdings wurde ebenso deutlich, dass die Expression nur auf einem niedrigen Niveau vorhanden ist und der erhöhte Anteil von PD-1 exprimierenden Zellen bei stimulierten NK-92/5.28.z nicht zuverlässig replizierbar war. Weder in dem Vergleich von mit Nivolumab in verschiedenen Konzentrationen vorbehandelten und nicht vorbehandelten NK-92/5.28.z im Rahmen eines 2D-Tumormodells in einem auf einer Luciferase-Reaktion beruhenden Zytotoxizitäts-Assays noch im Ramen eines 3D-Tumormodells in Form von Tumorsphäroiden, die aus den RH30-Zellen etabliert wurden, konnte eine signifikante Erhöhung der Toxizität der NK-92/5.28.z gegen die RH30-Zellen beziehungsweise die Sphäroide durch eine Vorbehandlung mit Nivolumab nachgewiesen werden. Es zeigte sich lediglich eine nicht signifikante Tendenz hin zu einer besseren Lyse von RH30-Zellen mit einem PD-L1 Knock-out durch die NK-92/5.28.z in dem 2D-Tumormodell, die allerdings in dem 3D-Tumormodell nicht beobachtet werden konnte. Mit dem Nachweis von PD-L1 auf den RH30 und PD-1 auf der NK-92/5.28.z zeigt sich ein mögliches Interaktionspotential zwischen den Tumorzellen und den NK-92/5.28.z über dieses Mitglied der Immuncheckpointrezeptoren im Rahmen einer potenziellen Immunzelltherapie im Patienten auf. Auch wenn in vitro keine Verbesserung der Toxizität der NK-92/5.28.z durch eine Blockade dieses Signalweges beobachtet werden konnte, ist zu beachten, dass durch die durchgeführten in vitro Versuche nicht alle Faktoren berücksichtigt werden konnten, die bei der Anwendung im Patienten möglicherweise eine zusätzliche Rolle spielen, wie zum Beispiel die notwendige Bestrahlung der NK-92/5.28.z oder die Interaktion mit anderen Zellen der Tumormikroumgebung.