Diseño de un sistema bacteriano para la producción y purificación de la proteína recombinante NcGRA7 utilizando la actividad de Sortasa A de Staphylococcus aureus

Introducción. La sortasa A (SrtA) es una enzima con actividad endopeptidasa y transpeptidasa presente principalmente en bacterias Gram positivas. Su capacidad para reconocer secuencias peptídicas específicas permitió su aplicación en el desarrollo de sistemas biotecnológicos para la producción y purificación de proteínas recombinantes. El uso de sistemas basados en SrtA optimiza el procesamiento proteico, facilita la clarificación de las muestras y permite obtener proteínas con altos niveles de pureza mediante procedimientos relativamente simples y reproducibles. Objetivo. Desarrollar un sistema bacteriano de producción y purificación de proteínas recombinantes basado en la actividad enzimática de la Sortasa A de Staphylococcus aureus (Sa-SrtA). Procedimiento. Se modificó el vector de expresión pET15b NT-Histidina (Novagen) mediante la incorporación de la secuencia codificante de Δ60Sa-SrtA (GenBank Ac. No.: AF162687), seguida del motivo consenso LPET4G, reconocido por la enzima para realizar la escisión proteolítica. Posteriormente, se clonó la secuencia de la proteína antigénica NcGRA7 de Neospora caninum (GenBank Ac. No.: U82229), generando la construcción His-tag–Δ60Sa-SrtA–LPET4G–NcGRA7. La expresión del sistema se realizó en Escherichia coli Rosetta 2 (DE3), y la purificación se llevó a cabo mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados (IMAC) utilizando resina Ni-NTA. La escisión enzimática se indujo en presencia de Ca²⁺ y triglicina, permitiendo la liberación de la proteína diana. Resultados. El sistema permitió la expresión y purificación eficiente de la proteína recombinante NcGRA7, obteniéndose la proteína mediante un único proceso cromatográfico mediado por la actividad de Δ60Sa-SrtA. Conclusión.El sistema basado en Δ60Sa-SrtA constituye una herramienta eficaz y reproducible para la producción y purificación de proteínas recombinantes, con potencial aplicación en el desarrollo de sistemas diagnósticos y otras aplicaciones biotecnológicas. Área de estudio general: Biología. Área de estudio específica: Biología molecular. Tipo de estudio: Artículos originales.