Prokaryotic Expression of CD4-1 Molecule in Humpback Grouper (Cromileptes altivelis) and Preparation of Its Monoclonal Antibody
Abstract
CD4-1分子是硬骨鱼类T淋巴细胞表面的关键膜蛋白，在适应性免疫应答中具有重要调控功能。当前，针对多数鱼类CD4-1分子的高特异性单克隆抗体十分缺乏，严重制约了鱼类T细胞免疫功能的深入研究及相关适应性免疫机制的解析。为制备驼背鲈（Cromileptes altivelis）CD4-1（CaCD4-1）的单克隆抗体，本研究构建了CaCD4-1原核表达载体，诱导表达并纯化获得重组蛋白rCaCD4-1。以该蛋白免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合与筛选，成功获得7株能够稳定分泌抗CaCD4-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株（6H3、6A2、6B2、6E1、6A4、6A5、6H2）。经ELISA鉴定，7株细胞株分泌的抗体均为IgG型，其中6E1属IgG2a亚型，其余为IgG1亚型。进一步对6H3株进行腹水制备并纯化抗体，ELISA测定腹水抗体的效价高于1:1088000。Western blot分析显示，该抗体能特异性识别rCaCD4-1，而不与rCaCD4-2发生交叉反应。流式细胞术检验该抗体识别天然抗原的反应性，结果显示，该抗体能特异性识别驼背鲈头肾淋巴细胞，其中CD4-1+ T细胞数量为12.3%，结果表明，本研究所制备的单克隆抗体具有高亲和力与良好特异性，为后续开展驼背鲈CD4-1分子的功能及其适应性免疫机制的研究提供良好的工具。
Fields of Study & Subjects
Aquaculture disease management and microbiota
Monoclonal and Polyclonal Antibodies Research
T-cell and B-cell Immunology
Publication details
- Journal / source
- Natural Science of Hainan University
- Volume
- 45
- Pages
- 1–1
- Publication date
- 1 January 2026
- Language
- ZH