Characterization and targeted rescue of a novel PRPF31 mutation in retinitis pigmentosa

Retinitis pigmentosa (RP) je genetické onemocnění, které způsobuje ztrátu fotoreceptorů a vede k poklesu centrálního a periferního vidění. Pre-mRNA processing factor 31 (PRPF31) je sestřihový faktor podílející se na sestavování a stabilizaci trojité malé jaderné ribonukleoproteinové částice (snRNP) U4/U6 U5, která je důležitou složkou spliceosomu. Různé mutace v PRPF31 jsou spojeny s přibližně 10 % případů autozomálně dominantní RP. V této studii identifikujeme novou bodovou mutaci v intronu 10 genu PRPF31, c.1074-11C>G. Tato mutace způsobuje RP u dvou sourozenců, přestože u jejich rodičů nejsou přítomny žádné fenotypové abnormality. Test účinnosti sestřihu intronu 10 pomocí lidských buněčných linií a krevních vzorků odhalil, že intron 10 není účinně odstraněn ani ve vzorcích divokého typu. Dále jsme vyvinuli splicingový reportér založený na intronu 10 PRPF31 a zavedli intronovou mutaci, která snížila produkci správně sestříhaných transkriptů. Kromě toho krevní vzorky pacientů vykazovaly aktivaci skrytého místa sestřihu, což vedlo k produkci aberantního transkriptu prodlouženého o 10 párů bází. Proteinové analýzy krevních vzorků pacientů, stejně jako PBMC (periferní mononukleární buňky), iPSC (indukované pluripotentní kmenové buňky) a RPE (retinální pigmentový epitel) buňky odvozené od pacientů...