Optimization of spheroid formation and growth monitoring of the K7M2 mouse osteosarcoma cell line

Namen magistrske naloge je bil optimizirati pripravo in gojenje sferoidov mišje osteosarkomske celične linije K7M2 glede na začetno število celic in trajanje gojenja ter ovrednotiti uporabnost metabolnih testov PrestoBlue™ in ATPlite 3D za spremljanje rasti in celične vitalnosti. Sferoidi predstavljajo tridimenzionalni tumorski model, ki posnema prostorsko organizacijo čvrstih tumorjev, vključno z nastankom proliferativne in nekrotične cone. Sferoide smo oblikovali z različno začetno gostoto celic (1000, 2000, 3000, 4000 in 10.000) ter jih gojili en ali dva tedna. Na preparatih sferoidov smo določili velikost nekrotične in proliferativne cone. Rezultati so potrdili značilno organizacijo con sferoidov ter pokazali, da večje začetno število celic in daljši čas gojenja vodita do večjih sferoidov in izrazitejšega razvoja nekrotične cone. Na podlagi teh rezultatov smo za nadaljnje analize izbrali sferoide z zmerno velikostjo nekrotične cone in na njih izvedli metabolne teste ter izračunali njihov volumen. Analiza metabolne aktivnosti je pokazala, da PrestoBlue™ test zazna trend naraščanja signala z rastjo sferoidov, vendar brez statistično značilne korelacije z volumnom. Test ATPlite 3D se v uporabljenih pogojih ni izkazal za zanesljivega, saj ni zagotavljal ponovljivih rezultatov. Ugotovili smo, da metabolna aktivnost ni linearno povezana z velikostjo sferoida, kar verjetno odraža difuzijske omejitve in presnovno heterogenost. Kombinacija morfoloških in metabolnih analiz tako omogoča celovitejše razumevanje stanja sferoidov ter predstavlja ustrezno osnovo za nadaljnje preučevanje terapevtskih pristopov, kot je elektrokemoterapija.