Proizvodnja PR-10b proteina sočiva (Lens culinaris) rekombinantnom DNK tehnologijom

Cilj ovog rada bio je proizvodnja i eksperimentalna potvrda ekspresije rekombinantnog PR-10b proteina sočiva primenom rekombinantne DNK tehnologije u prokariotskom ekspresionom sistemu. Gen za PR-10b protein ukloniran je u ekspresioni vektor, a potom su sojevi Escherichia coli DH5α (radi umnožavanja plazmida) i BL21 (radi ekspresije proteina) transformisani plazmidom. Prisustvo gena od interesa u plazmidu potvrđeno je restrikcionom analizom, dok je ekspresija rekombinantnog proteina indukovana dodatkom IPTG-a. Uspešnost ekspresije analizirana je SDS-PAG elektroforezom a potvrđena je imunoblot metodom korišćenjem anti-His antitela. Na imunoblotu je detektovana traka na očekivanoj molekulskoj masi od približno 18 kDa, što odgovara rekombinantnom PR-10b proteinu. Dobijeni rezultati potvrđuju uspešnu proizvodnju rekombinantnog PR-10b proteina u bakterijskom ekspresionom sistemu. Proizvedeni rekombinantni PR-10b protein predstavlja osnovu za dalja ispitivanja njegove IgE-reaktivnosti i potencijalnu primenu u molekularnoj dijagnostici alergije na sočivo.