New Pharmacological Approaches to Reduce PML-Mediated Neuroinflammation in Multiple Sclerosis

La proteina della leucemia promielocitica (PML) è un noto oncosoppressore, storicamente descritta come una proteina nucleare. Studi recenti hanno rivelato che PML è localizzata anche in compartimenti extra-nucleari, in particolare a livello delle membrane associate ai mitocondri (MAMs), siti di contatto specializzati tra reticolo endoplasmatico (RE) e mitocondri. In questa sede, PML regola diversi processi fondamentali, tra cui morte cellulare, autofagia e trasferimento del calcio dal RE ai mitocondri. Questa tesi di dottorato esplora un ruolo aggiuntivo e meno caratterizzato di PML nelle MAMs: la regolazione delle risposte immunitarie durante processi neuroinfiammatori, con particolare attenzione all’attivazione dell’inflammasoma NLRP3. L’ipotesi centrale è che l’assenza o la mutazione di PML esasperino l’attivazione immunitaria, contribuendo così all’insorgenza e alla progressione delle malattie neurodegenerative, in particolare della sclerosi multipla. Analizzando l’asse PML–NLRP3, questo lavoro mira non solo a chiarire le basi meccanicistiche della regolazione dell’inflammasoma NLRP3, ma anche a identificare potenziali strategie terapeutiche mirate a questo pathway. L’approccio sperimentale ha utilizzato colture primarie di glia mista, ottenute dalle cortecce di topi wildtype (PML+/+) e PML-/-. Dopo l’ottimizzazione dei protocolli di trattamento e stimolazione mediante saggi di vitalità cellulare, diverse tecniche — tra cui Western blotting, immunofluorescenza ed immunodosaggi — sono state impiegate per valutare le differenze nell’attivazione di NLRP3 tra i due genotipi. Successivamente, le cellule sono state trattate con un pannello di cinque nuovi inibitori dell’inflammasoma NLRP3, due dei quali sviluppati utilizzando una tecnologia PROTAC innovativa. I risultati presentati in questa tesi evidenziano un’interazione precedentemente non riconosciuta tra PML e NLRP3, che influenza in modo significativo la segnalazione neuroinfiammatoria. Parallelamente, dati preliminari indicano che i composti testati attenuano le risposte mediate da NLRP3. Complessivamente, questi risultati ampliano la nostra comprensione delle funzioni extra-nucleari di PML e forniscono nuove intuizioni sulla regolazione dell’inflammasoma NLRP3, con possibili implicazioni per lo sviluppo di terapie mirate nella sclerosi multipla e in disturbi correlati.